一、 產品簡介

產品名稱：大鼠氣管軟骨細胞組織來源氣管組織

細胞簡介

大鼠氣管軟骨細胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環狀軟骨構成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環，缺口向后，各軟骨環以韌帶連接起來，環后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接，保持了持續張開狀態。軟骨由軟骨細胞和細胞間質組成。軟骨內的基質呈凝膠狀態，具有較大韌性。軟骨是以支持作用為主的結締組織。軟骨內不含血管和淋巴管，營養物由軟骨膜內的血管中滲透到細胞間質中，再營養骨細胞。根據細胞間質的不同可把軟骨分為3種，即透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨。透明軟骨的基質是由膠原纖維、原纖維和周圍無定形的基質組成。在胚胎時期有臨時支架作用，后來這種作用被骨代替。成人的透明軟骨主要分布在氣管和支氣管壁中、肋骨的胸骨端和骨的表面（關節軟骨）。

方法簡介

大鼠氣管軟骨細胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測

大鼠氣管軟骨細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息

培養基                  含FBS、生長添加劑、 Penicillin、Streptomycin等

換液頻率               每3-4天換液一次                        

生長特性               貼壁

細胞形態               梭形、多角形

傳代特性               可傳5代左右； 3代以內狀態最佳傳代比例              

傳代比例                    1:2

消化液                   0.25%胰蛋白酶

培養條件               氣相：空氣， 95% ；CO?   ,  5%

大鼠氣管軟骨細胞體外培養周期有限， 建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培 養， 以此保證該細胞的最佳培養狀態。

二、 細胞培養狀態

發貨時發送細胞電子版照片

三、 使用方法

大鼠氣管軟骨細胞是一種梭形、多角形細胞，細胞形態呈貼壁，在技術部標準操作流程下，細胞可傳 5代左右；3代以內狀態最佳，建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% CO?  、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4 h ，以穩定細胞。

貼壁細胞消化

1）吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1 mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液， 37℃溫浴1-3 min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5 mL完全培養基終止消化；

3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5 mL ，置于37℃、5% CO?  、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4）待細胞完全貼壁后，培養觀察，用于實驗；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。

細胞實驗

因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原 Ⅰ（2-5 μg/cm²),  多聚賴氨酸PLL（0.1 mg/mL），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

四、 注意事項

●    培養基于4℃條件下可保存3個月。

●    在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

●    消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

●    建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運

輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

●    該細胞只可用于科研。

備注： 由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考。