熒光抗體技術三個方法特性

 免疫熒光技術原理：免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內的相應抗原（或抗體）。在組織或細胞內形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受外來激發光的照射而發生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細胞，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。

1. 直接法

直接法是熒光抗體技術蕞簡單、基本的方法。它通過標記抗體直接與相應抗原（待檢抗原標本）結合，來鑒定未知抗原。

其優點為：

①由于在反應中只有兩種因子參與，結果判斷較簡單；

②特異性強，與其他抗原交叉染色較少；

③操作步驟少，方法簡便、省時。

其缺點有：

①敏感性較差；

②一種標記抗體只能鑒定一種抗原；

③不能用于鑒定未知抗體。

2. 雙標記法

雙標記法是用兩種熒光素（常用FITC和PE）分別標記特異性不同的抗體，用于檢測同一標本中的不同抗原。此法常用于細胞表面抗原和受體的研究。

3. 間接法

間接法是目前最常用的方法。首先用已知未標記的抗體（第1抗體）與待檢抗原反應或用未知抗體與已知抗原反應，反應一定時間后，洗去未結合的抗體，再與標記的抗免疫球蛋白抗體（二抗）反應。在第1步反應中，若抗原抗體發生了反應，則抗體被固定在標本上，那么第二步反應中標記的抗體（二抗）必然與第1步反應形成的抗原抗體復合物中的抗體發生反應，這樣就可以通過二抗的示蹤，對標本中未知抗原或抗體進行鑒定。

其優點為：

①敏感性較高，是直接法的5-10倍；

②用一種標記的抗體，就能與一種以上的相應的抗體或抗原配合鑒定多種未知的抗原或抗體；

③既能鑒定未知抗原，又能鑒定未知抗體。

其缺點有：

①在反應中有多種因子參與，容易產生非特異性染色，結果判斷有時較困難；

②操作步驟多，費時。